摘要
受体酪氨酸激酶(RTK) -RAS信号通过下游丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)级联调控细胞增殖和存活。SHOC2-MRAS-PP1C全磷酸酶复合物作为RTK-RAS信号传导的关键调节因子,通过去除RAF家族蛋白上的抑制性磷酸化事件来增强MAPK信号传导<年代up><一个d一个t一个-track="click" data-track-action="reference anchor" data-track-label="link" data-test="citation-ref" aria-label="Reference 1" title="1gydF4y2Ba" href="//www.sabinai-neji.com/articles/s41586-022-04928-2" id="ref-link-section-d313624314e819">1。SHOC2与MRAS和PP1C形成三元复合物,该复合物中的人类种系功能获得突变可导致先天性RASopathy综合征<年代up><一个d一个t一个-track="click" data-track-action="reference anchor" data-track-label="link" data-test="citation-ref" title="2gydF4y2Ba" href="#ref-CR2" id="ref-link-section-d313624314e823">2,<一个d一个t一个-track="click" data-track-action="reference anchor" data-track-label="link" data-test="citation-ref" title="3.gydF4y2Ba" href="#ref-CR3" id="ref-link-section-d313624314e823_1">3.,<一个d一个t一个-track="click" data-track-action="reference anchor" data-track-label="link" data-test="citation-ref" title="4gydF4y2Ba" href="#ref-CR4" id="ref-link-section-d313624314e823_2">4,<一个d一个t一个-track="click" data-track-action="reference anchor" data-track-label="link" data-test="citation-ref" aria-label="Reference 5" title="5gydF4y2Ba" href="//www.sabinai-neji.com/articles/s41586-022-04928-2" id="ref-link-section-d313624314e826">5。然而,人们对这种复合体的结构和组装知之甚少。在这里,我们使用低温电子显微镜来解析SHOC2-MRAS-PP1C复合物的结构。我们定义了全酶相互作用的生物物理原理,阐明了复合物的组装顺序,并系统地询问了几乎所有可能的错义变异的功能后果<我>SHOC2通过深度突变扫描。我们发现,SHOC2通过富含亮氨酸的重复区域的凹表面结合PP1C和MRAS,并通过包含一个隐式RVXF基序的n端紊乱区域进一步结合PP1C。复合物的形成最初是由SHOC2和PP1C之间的相互作用介导的,并通过gtp负载的MRAS结合来稳定。这些观察结果解释了ras病变和癌症中突变的SHOC2如何稳定复合物成员的相互作用,从而增强全磷酸酶的活性。总之,这个整合的结构功能模型全面定义了SHOC2-MRAS-PP1C全磷酸酶复合物中的关键结合相互作用,并将为治疗开发提供信息。
受体酪氨酸激酶(RTK) -RAS信号通过下游丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)级联调控细胞增殖和存活。SHOC2-MRAS-PP1C全磷酸酶复合物作为RTK-RAS信号传导的关键调节因子,通过去除RAF家族蛋白上的抑制性磷酸化事件来增强MAPK信号传导<年代up><一个d一个t一个-track="click" data-track-action="reference anchor" data-track-label="link" data-test="citation-ref" aria-label="Reference 1" title="1gydF4y2Ba" href="//www.sabinai-neji.com/articles/s41586-022-04928-2" id="ref-link-section-d313624314e819">1
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在PDB (apo-SHOC2 x射线结构,PDB ID)中沉积了apo-SHOC2和cro - em结构的坐标和结构因子<一个href="https://doi.org/10.2210/pdb7T7A/pdb">7 t7a;复杂低温电镜结构,PDB ID<一个href="https://doi.org/10.2210/pdb7UPI/pdb">7 upi).复杂成员的疾病相关突变的变异信息是公开的(ClinVar:<一个href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/clinvar/">https://www.ncbi.nlm.nih.gov/clinvar/和宇宙:<一个href="https://cancer.sanger.ac.uk/cosmic">https://cancer.sanger.ac.uk/cosmic).
代码的可用性
分子操作环境(MOE)和Schrödinger软件可公开用于商业和非商业用途。DMS分析的自定义代码可在以下网址下载:<一个href="https://github.com/jkwonbio/Structure-function-analysis-of-the-SHOC2-MRAS-PP1C-holophosphatase-complex.git">https://github.com/jkwonbio/Structure-function-analysis-of-the-SHOC2-MRAS-PP1C-holophosphatase-complex.git。
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致谢
本研究部分由NIH-NCI资助(F32CA243290, j.k k);Lustgarten基金会;多丽丝·杜克慈善基金会;胰腺癌行动网络;NIH-NCI K08 CA218420-02和P50CA127003 (A.J.A.);和丹娜-法伯癌症研究所黑尔胰腺癌研究中心(A.J.A.和W.C.H.), U01 CA176058 (W.C.H.), U01 CA224146 (A.J.A.和W.C.H.)和U01 CA250549 (A.J.A.和W.C.H.)。这项工作也得到了迪尔菲尔德-布罗德发现研究合作组织的部分资助。迪尔菲尔德管理公司是一家专注于医疗保健的投资管理公司。
作者信息
道德声明
相互竞争的利益
D.E.R.接受功能基因组学联盟(Abbvie, BMS, Jannsen, Merck和Vir)成员的研究资助,并且是Addgene的董事。D.L.M.是肖克,哈迪和培根法律咨询公司的顾问。F.M.是以下公司的顾问:Amgen、Daiichi、Frontiers Med、Exuma Biotech、Ideaya Biosciences、Kura Oncology、Leidos Biomedical Research、PellePharm、Pfizer、PMV Pharma和Quanta Therapeutics。F.M.是以下公司的顾问和联合创始人(拥有所有权权益,包括股票期权):BridgeBio;DNAtrix, Olema制药和Quartz。F.M.是国家癌症研究所RAS倡议在弗雷德里克国家实验室癌症研究-莱多生物医学研究的科学主任。F.M.一直是Daiichi Sankyo和Gilead Sciences的研究资助的接受者,目前获得了Boehringer Ingelheim的资助。W.C.H.是Thermo Fisher Scientific、Solasta Ventures、MPM Capital、KSQ Therapeutics、Tyra Biosciences、Jubilant Therapeutics、Function Oncology、RAPPTA Therapeutics、Frontier Medicine和Calyx的顾问。A.J.A.曾为Oncorus、Arrakis Therapeutics、Syros Pharmaceuticals、Boehringer Ingelheim、T-knife Therapeutics、AstraZeneca、Mirati Therapeutics和默克公司提供咨询服务,并从Mirati Therapeutics、Syros Pharmaceuticals、Bristol Myers Squibb、Revolution Medicines、Novartis和Novo Ventures获得与这项工作无关的研究资金。W.C.H.和A.J.A.从迪尔菲尔德获得了与这里描述的工作相关的资金。
同行评审
同行评议信息
自然感谢匿名审稿人对这项工作的同行评审所做的贡献。
额外的信息
出版商的注意b施普林格《自然》杂志对已出版的地图和机构的管辖权要求保持中立。
扩展数据图和表
图1 SHOC2全磷酸酶复合物的低温电镜图、接触面表面模型和二级结构注释。
一个用于对复杂结构建模的低温电镜图,使用所示的彩色图根据局部分辨率着色。这张地图被自动确定的地图削尖了<我>B-因子为- 90.7922 Å<年代up>2并过滤到局部分辨率,这两者都是由Relion中实现的方法决定的。b,在最终3D地图细化过程中确定的最终粒子集的角度分布的3D直方图。箱子的大小和颜色都与颗粒计数相对应。视图与中所示相同gydF4y2Ba(一),地图本身呈现在灰色直方图的中心。c,由最终粒子集生成的无参考2D类平均值。d,傅里叶壳相关(FSC)的独立改进的半地图,从最终的3D地图改进(蓝色),完整的地图和原子模型(橙色)。“金标准”半地图FSC计算和修正屏蔽效应使用赖利;基于2.9 Å全局分辨率,使用PHENIX对模型进行掩膜计算地图模型FSC。FSC=0.5和0.143阈值用虚线表示。半地图FSC以2.8925 Å分辨率越过0.143阈值,地图模型FSC以3.01 Å分辨率越过0.5阈值。e、未结合的SHOC2、PP1CA和MRAS的表面模型。灰色表示相互作用的表面。f,带有二级结构化标记的MRAS卡通表示。g, PP1CA卡通表示,带有二级结构化标签。h、SHOC2、LRR和PP1C的相互作用gydF4y2Ba我, SHOC2 N-term区域和PP1CjPP1C和MRASk图中蛋白-蛋白相互作用位点对应的局部电子密度图显示了SHOC2、LRR和MRAS。<一个d一个t一个-track="click" data-track-label="link" data-track-action="figure anchor" href="//www.sabinai-neji.com/articles/s41586-022-04928-2">4。SHOC2为蓝绿色,PP1CA为黄色,MRAS为洋红色。地图(2Fo-Fc)是4.5 sigma。
图2 SHOC2配合物的MD模拟(200 ns), T411和n端RVXF基序的SHOC2-PP1C接触面的低温电镜电子密度图,以及PP1C与配合物成员成对相互作用的AUC分析。
一个, SHOC2复合体的MD仿真系统概述。b,蛋白质α-碳的均方根偏差(RMSD)。c, SHOC2与PP1C接触残基对的相互作用分数。d, MRAS与SHOC2接触残基对的相互作用分数。e, MRAS与PP1C接触残基对的相互作用分数。f, SHOC2的T411(蓝绿色)和PP1CA的K147(橙色)及其邻近残基(左)和与PP1c的RVXF结合袋相互作用的SHOC2 n端残基(右)的局部电子密度图。地图(2Fo-Fc)是4.5 sigma。g与单独PP1C相比,在存在SHOC2和MRAS-GppCp的情况下,PP1C结合SHOC2或MRAS-GppCp的SV-AUC分析。
图3 SHOC2- mras结合表面视图,变异取代的硅能计算,以及SHOC2 M173突变的内在蛋白质稳定性和相互作用能与DMS功能评分的相关性。
的结构观gydF4y2Ba一个、SHOC2和b, MRAS的疏水性(黄色)和极性(蓝绿色)表面着色,红色轮廓表示疏水相互作用表面。c, Box和whisker图为野生型M173和变体模型之间计算的SHOC2-MRAS相互作用能的差异。基于它们的疏水性和电荷态进行硅诱变建模:疏水性(n = 8个残基计算能:I、V、L、F、M、A、W和P);极性不带电基团包括(n = 7个残基计算能:C、G、T、S、Y、n、Q);极带负电(n = 2残基计算能:D、E);极性正电荷(n = 3个残基计算能量:H, K和R)。中线表示中位数,须表示第一和第四四分位数,框边表示第二和第三四分位数。在晶须边界以外的所有其他观测数据点被绘制为离群值。平均值和异常值分别用叉和点表示。在DMS屏幕上的SHOC2 M173变异适应度得分在x轴和d,计算了SHOC2与复合物成员之间的蛋白质相互作用能;e对蛋白质内在稳定性的影响;和f,组合多元线性模型(0.12*接触能+ 0.25*蛋白质固有稳定性−0.75)在y轴上表示。线(蓝色)表示线性回归模型,最佳拟合线的95%置信区间(黑色虚线),R<年代up>2(拟合优度)和线性模型p值(回归系数显著非零的分析)。
图4低温电镜全酶中SHOC2和SHOC2晶体的比较。
一个,高保守性的SHOC2 LRRs的一级序列分析与上述序列一致。典型的高度保守的富含亮氨酸的重复基序如上所示;基于结构数据的疏水残基盒子(蓝绿色);LRR11和LRR12核心疏水性核心残基的破坏(蓝框)。b,两个相邻lrr之间的二面角测量值(红色文本)和晶体SHOC2在LRR1上的R104 α碳与LRR20上的I545 α碳之间的距离(用线表示),以及c, Cryo-EM全酶中的SHOC2。d晶体SHOC2和SMP全酶的200-ns MD模拟所反映的每残基波动。
图5与RAS-RAF二聚体多聚体单元相互作用的SHOC2复合物的计算机模拟。
一个对17个已建立的范德华、静电和溶剂化能(负s分数的自然对数)优先的模型进行了人工标注,以确定RAS成员在质膜内定向/嵌入的空间适应性(红点表示)。选择了在膜内容纳RAS定向的最有利的能量模型(模型6)。b建立了与二聚体多聚体(2x RAS、2x RAF、2x MEK和2x 14-3-3)相互作用的SHOC2复合物的结构模型c&d,额外的旋转视图对接的复杂。单个蛋白质单位被着色并标记。
图6 SHOC2(M173I)、PP1C(P50R)和MRAS(Q71L)突变的计算机建模和能量计算,以及MRAS复合体关联中PP1C亚型的评估。
一个肖克2 M173和模拟M173I突变的放大图,与MRAS上接触残基的距离测量。bPP1C P50和模拟P50R突变的放大图,与SHOC2上接触残基的距离测量。c, MRAS Q71和模拟Q71L突变的放大视图,与周围残基的距离测量。d,预测了WT和突变残基的相互作用能。e在MRAS-GppCp存在下,对PP1C亚型(PP1Cα/β/γ)形成的SHOC2全酶进行SV-AUC分析。1个技术重复的线迹,代表3个生物重复。
图7在SHOC2全磷酸酶复合体形成的背景下对RAS亚型的评估。
一个RAS亚型(MRAS、KRAS、HRAS、NRAS)的多序列比对分析(EMBL-EBI ClustalW)。开关I(红色)、开关II(蓝色)和P-loop(橙色)有标注。与PP1C(青色突出显示)和SHOC2(黄色突出显示)相互作用的MRAS残基如果起作用,则用方框标出<−1.5kcal/mol计算的配对相互作用。b,通过RAS异构体分子动力学模拟计算的平均相互作用能(n = 5个代表性帧/RAS异构体的平均值),误差条表示平均值的标准差。c, MRAS和KRAS复合物与活化的SHOC2-PP1C的BLI实验。结合常数的平均值(n = 3个技术重复,代表3个独立实验)(<我>K一个,<我>kd,<我>KD和k在)和误差条(标准差)。d从共转染flag标记的RAS和myc标记的SHOC2的293T细胞中免疫沉淀各种外源表达的致癌RAS亚型(代表3个生物重复)。
图8 SHOC2 DMS屏幕的高分辨率热图。
测井的高分辨率热图表示<年代ub>2-fold change (LFC)等位基因富集和缺失在曲美替尼处理和载体对照之间,以野生型(沉默突变体)的平均值为中心,并按比例缩放到无基因突变体(缩放后的LFC)的平均值,提供了相对于SHOC2 WT的富集(红色)和缺失(蓝色)。数值越高=保守性越低)和低温电镜数据中的蛋白质相互作用残基(PPI)(方法)。下面提供了一个额外的热图,它描述了根据生物物理特征分组的残留物的平均缩放LFC分数(橙色= GOF;紫色= LOF),包括负电荷(D/E)、正电荷(K/R)和疏水(G/A/V/L/I/M)、极性不带电(S/T/C/Y/N/Q)、非极性大芳族(F/W/Y/H)和螺旋破断(P/G)。
图9基于DMS和SHOC2复合物内残基接触点分析SHOC2残基的突变耐受性,以及SHOC2变异对低附着生长、基线MAPK信号传导和MEK抑制反应的影响。
一个,与核心残基(深绿色,n = 198位)和表面非接触残基(浅绿色,n = 329位)相比,复合构件PP1C(黄色,n = 28位)和MRAS(栗色,n = 26位)之间表面接触残基的平均位置活力。中线代表中位数,胡须代表第一和第四个四分位数,框边代表第二和第三个四分位数。bMIA PaCa-2敲除内源性SHOC2,稳定地重新表达各种SHOC2功能获得(红色)和功能丧失(蓝色)变异,将其接种于超低附着板中培养7天。通过Cell-Titer-Glo在x轴上显示了使用PaTu-8902的适应度屏幕上缩放的LFC的活力终点。误差条表示GILA CTG活力的标准差(n=6个技术重复;3个生物重复的代表性)。线(绿色)表示简单线性回归模型,95%置信区间(黑色虚线),R<年代up>2(拟合优度),线性模型p值< 0.0001(回归系数分析显著非零)。c在敲除内源性SHOC2的KRAS突变细胞系MIA PaCa-2中,野生型(WT)和功能获得或功能丧失(GOF/LOF)变体稳定表达。dP-S259 RAF1相对于总RAF1的密度测定定量,并归一化为野生型表达细胞的水平。中线表示中位数,胡须表示四分位数范围。***p<0.001, LOF (n = 5个变异)和GOF (n = 6个变异)SHOC2等位基因间的双侧t检验,代表3个生物重复。e在敲除内源性SHOC2的KRAS突变细胞系MIA PaCa-2中,WT和GOF/LOF变体稳定表达。western blot前用MEK1/2抑制剂trametinib (10nM)处理细胞24 h。fP-S259 RAF1相对于总RAF1的密度测定定量,并归一化为野生型表达细胞的水平。中线表示中位数,胡须表示四分位数范围。***p<0.001, LOF (n = 6个变异)和GOF (n = 6个变异)SHOC2等位基因间的双侧t检验,代表3个生物重复。g,在共转染HA-MRAS的293T细胞中,v5标记的SHOC2变异体的免疫沉淀。h,相对猎物密度分析,包括内源性PP1CB(黄色)和MRAS(褐红色)归一化到V5饵料(y轴)和DMS适应度评分(LFC Z-score) (x轴)。直线表示简单线性回归模型R<年代up>2(拟合优度),且线性模型p值< 0.0001(回归系数分析显著非零)表明,代表3个生物重复。gydF4y2Ba我, SHOC2 n端区域(残基60-68)的DMS结果通过序列标记图(ggseqlogo)在各自位置上的每个氨基酸取代来描绘(ggseqlogo)。
图10基于氨基酸取代的生物物理属性和N434D的硅诱变研究对SHOC2 LRR表面突变的功能后果,以及对SHOC2 T411A、Q249K和G63R突变的200-ns MD模拟。
SHOC2 LRR中介导复合物成员结合的三个主要区域:(1)C-term pp1c结合区-左;(2) n项pp1c结合区-中间;(3)凹面的MRAS结合面(右)以列表示。SHOC2的静电表面描述(红色=负;蓝色=正)一个&b, SHOC2 LRR区域表面结合PP1C和c, MRAS(第一行),以及标记的SHOC2的蛋白质-蛋白质相互作用残基。随后,根据每个给定表面位置取代残基的生物物理特征,对每个表面残基的SHOC2 DMS屏幕功能评分(Scaled LFC)进行平均,并用比色标度(橙色= GOF;紫色= LOF)。正电荷残基(K/R)的平均功能效应(平均缩放LFC)呈现(第二行)d, c项pp1c结合区-左;e, n项pp1c结合区-中间;f,凹面MRAS结合面-右。带负电荷残基(D/E)的平均功能效应(第三行)为g, c项pp1c结合区-左;h, n项pp1c结合区-中间;gydF4y2Ba我,凹面MRAS结合面-右。疏水残基-非极性,非芳香(G/A/V/L/I/M)的平均功能效应(第4行)j, c项pp1c结合区-左;k, n项PP1C结合区-中间;l,凹面MRAS结合面。gydF4y2Ba米,预测了SHOC2 WT和N434D突变在PP1C上与K150的相互作用能。n,在200-ns MD模拟中,WT与N434D突变接触残基对的相互作用分数。放大视图的shoc2n434o与PP1C K150的距离测量模拟了N434D突变。p, WT和突变的接触残基对的相互作用分数。r,放大视图的shoc2t411和模拟T411A突变与PP1C接触残基的距离测量。gydF4y2Ba年代与PP1C接触残基的距离测量,对shoc2q249和模拟Q249K突变的放大视图。t,模拟的shoc2g63和G63R突变与PP1C接触残基的距离测量的放大视图。计算出的相互作用能被着色到SHOC2蛋白表面,以便可视化。u,在稳定(ddG)蛋白相互作用位点发生突变的SHOC2变异体的箱形图<−1)、惰性(ddG: >−1和< 1)、不稳定(ddG: >−1和< 1)>1)通过FoldX计算。中线代表中位数,胡须代表第一和第五四分位数,框边代表第二和第四四分位数的SHOC2变异,其残基突变与PP1C相互作用,稳定(n = 18个变异),惰性(n = 912个变异),不稳定(n = 134个变异),或与MRAS相互作用,稳定(n = 13个变异),惰性(n = 779个变异),不稳定(n = 196个变异),在DMS屏幕中进行功能评估。
图11 SHOC2全磷酸酶复合物的可药性分析及所提出的SHOC2全磷酸酶复合物组装模型示意图。
一个·SHOC2复合物SiteMap分析,确定SHOC2 - pp1c之间可用药的结合袋;b, SHOC2-MRAS和c, PP1C-MRAS。dSiteScore的上限为1.0,以限制带电和高极性位点的亲水性影响。SiteScore为0.80,可以准确区分药物结合位点和非药物结合位点。对于可药物性评分,亲水性评分不设上限。e, SHOC2全磷酸酶复合物的假设模型。MRAS与GDP结合,而PP1C和SHOC2在细胞质中以结合/非结合平衡存在。在RTK刺激和MRAS - gtp激活后,SHOC2 - pp1c复合物与质膜上的MRAS结合,形成稳定的复合物,并可能将SHOC2全磷酸酶定位到具有集中ras结合的RAF1的脂质结构域,从而使RAF上的' S259 '去磷酸化,并使MAPK信号传导。
补充信息
补充图1
来自扩展数据的未裁剪免疫印迹图7和图9。a,扩展数据的免疫印迹图7显示,在共转染flag标记的RAS和myc标记的SHOC2的293T细胞中,外源表达的致癌RAS亚型的表达。b,扩展数据免疫印迹图9显示,在敲除内源性SHOC2后,KRAS突变细胞系MIA PaCa-2中稳定表达了SHOC2变体。-肌动蛋白,样品处理控制。图9显示,在敲除内源性SHOC2并使用MEK1/2抑制剂曲美替尼处理后,KRAS突变细胞系MIA PaCa-2中稳定表达了SHOC2变体。-肌动蛋白,样品处理控制。图9显示了共转染HA-MRAS的293T细胞中v5标记的SHOC2变异体的免疫沉淀。-肌动蛋白,装载控制。western blotting检测蛋白质,使用指定的抗体,橙色矩形表示种植位置。
补充表1
mras配合物相互作用能。SHOC2-PP1C-MRAS复合物成员的所有残基相互作用能计算总结,包括突变体模型。
补充表2
深度突变扫描(DMS)屏幕数据。来自DMS屏幕的数据(每个变量水平缩放的LFC和平均位置缩放的LFC分数)。
补充表3
整合DMS和临床相关数据集。癌症(COSMIC)和noonan样综合征(ClinVar)的SHOC2、MRAS和PP1C的总结文件。
权利和权限
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权建军,哈建,边勇,刘建军。<我>et一个l。SHOC2-MRAS-PP1C全磷酸酶复合物的结构-功能分析。<我>自然609, 408-415(2022)。https://doi.org/10.1038/s41586-022-04928-2
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震惊英国皇家空军
自然,结构与分子生物学(2022)
结构钥匙解锁RAS-MAPK细胞信号通路
自然(2022)
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数据可用性
在PDB (apo-SHOC2 x射线结构,PDB ID)中沉积了apo-SHOC2和cro - em结构的坐标和结构因子<一个href="https://doi.org/10.2210/pdb7T7A/pdb">7 t7a;复杂低温电镜结构,PDB ID<一个href="https://doi.org/10.2210/pdb7UPI/pdb">7 upi).复杂成员的疾病相关突变的变异信息是公开的(ClinVar:<一个href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/clinvar/">https://www.ncbi.nlm.nih.gov/clinvar/和宇宙:<一个href="https://cancer.sanger.ac.uk/cosmic">https://cancer.sanger.ac.uk/cosmic).
在PDB (apo-SHOC2 x射线结构,PDB ID)中沉积了apo-SHOC2和cro - em结构的坐标和结构因子<一个href="https://doi.org/10.2210/pdb7T7A/pdb">7 t7a
代码的可用性
分子操作环境(MOE)和Schrödinger软件可公开用于商业和非商业用途。DMS分析的自定义代码可在以下网址下载:<一个href="https://github.com/jkwonbio/Structure-function-analysis-of-the-SHOC2-MRAS-PP1C-holophosphatase-complex.git">https://github.com/jkwonbio/Structure-function-analysis-of-the-SHOC2-MRAS-PP1C-holophosphatase-complex.git。
分子操作环境(MOE)和Schrödinger软件可公开用于商业和非商业用途。DMS分析的自定义代码可在以下网址下载:<一个href="https://github.com/jkwonbio/Structure-function-analysis-of-the-SHOC2-MRAS-PP1C-holophosphatase-complex.git">https://github.com/jkwonbio/Structure-function-analysis-of-the-SHOC2-MRAS-PP1C-holophosphatase-complex.git
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致谢
本研究部分由NIH-NCI资助(F32CA243290, j.k k);Lustgarten基金会;多丽丝·杜克慈善基金会;胰腺癌行动网络;NIH-NCI K08 CA218420-02和P50CA127003 (A.J.A.);和丹娜-法伯癌症研究所黑尔胰腺癌研究中心(A.J.A.和W.C.H.), U01 CA176058 (W.C.H.), U01 CA224146 (A.J.A.和W.C.H.)和U01 CA250549 (A.J.A.和W.C.H.)。这项工作也得到了迪尔菲尔德-布罗德发现研究合作组织的部分资助。迪尔菲尔德管理公司是一家专注于医疗保健的投资管理公司。
本研究部分由NIH-NCI资助(F32CA243290, j.k k);Lustgarten基金会;多丽丝·杜克慈善基金会;胰腺癌行动网络;NIH-NCI K08 CA218420-02和P50CA127003 (A.J.A.);和丹娜-法伯癌症研究所黑尔胰腺癌研究中心(A.J.A.和W.C.H.), U01 CA176058 (W.C.H.), U01 CA224146 (A.J.A.和W.C.H.)和U01 CA250549 (A.J.A.和W.C.H.)。这项工作也得到了迪尔菲尔德-布罗德发现研究合作组织的部分资助。迪尔菲尔德管理公司是一家专注于医疗保健的投资管理公司。
作者信息
道德声明
相互竞争的利益
D.E.R.接受功能基因组学联盟(Abbvie, BMS, Jannsen, Merck和Vir)成员的研究资助,并且是Addgene的董事。D.L.M.是肖克,哈迪和培根法律咨询公司的顾问。F.M.是以下公司的顾问:Amgen、Daiichi、Frontiers Med、Exuma Biotech、Ideaya Biosciences、Kura Oncology、Leidos Biomedical Research、PellePharm、Pfizer、PMV Pharma和Quanta Therapeutics。F.M.是以下公司的顾问和联合创始人(拥有所有权权益,包括股票期权):BridgeBio;DNAtrix, Olema制药和Quartz。F.M.是国家癌症研究所RAS倡议在弗雷德里克国家实验室癌症研究-莱多生物医学研究的科学主任。F.M.一直是Daiichi Sankyo和Gilead Sciences的研究资助的接受者,目前获得了Boehringer Ingelheim的资助。W.C.H.是Thermo Fisher Scientific、Solasta Ventures、MPM Capital、KSQ Therapeutics、Tyra Biosciences、Jubilant Therapeutics、Function Oncology、RAPPTA Therapeutics、Frontier Medicine和Calyx的顾问。A.J.A.曾为Oncorus、Arrakis Therapeutics、Syros Pharmaceuticals、Boehringer Ingelheim、T-knife Therapeutics、AstraZeneca、Mirati Therapeutics和默克公司提供咨询服务,并从Mirati Therapeutics、Syros Pharmaceuticals、Bristol Myers Squibb、Revolution Medicines、Novartis和Novo Ventures获得与这项工作无关的研究资金。W.C.H.和A.J.A.从迪尔菲尔德获得了与这里描述的工作相关的资金。
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D.E.R.接受功能基因组学联盟(Abbvie, BMS, Jannsen, Merck和Vir)成员的研究资助,并且是Addgene的董事。D.L.M.是肖克,哈迪和培根法律咨询公司的顾问。F.M.是以下公司的顾问:Amgen、Daiichi、Frontiers Med、Exuma Biotech、Ideaya Biosciences、Kura Oncology、Leidos Biomedical Research、PellePharm、Pfizer、PMV Pharma和Quanta Therapeutics。F.M.是以下公司的顾问和联合创始人(拥有所有权权益,包括股票期权):BridgeBio;DNAtrix, Olema制药和Quartz。F.M.是国家癌症研究所RAS倡议在弗雷德里克国家实验室癌症研究-莱多生物医学研究的科学主任。F.M.一直是Daiichi Sankyo和Gilead Sciences的研究资助的接受者,目前获得了Boehringer Ingelheim的资助。W.C.H.是Thermo Fisher Scientific、Solasta Ventures、MPM Capital、KSQ Therapeutics、Tyra Biosciences、Jubilant Therapeutics、Function Oncology、RAPPTA Therapeutics、Frontier Medicine和Calyx的顾问。A.J.A.曾为Oncorus、Arrakis Therapeutics、Syros Pharmaceuticals、Boehringer Ingelheim、T-knife Therapeutics、AstraZeneca、Mirati Therapeutics和默克公司提供咨询服务,并从Mirati Therapeutics、Syros Pharmaceuticals、Bristol Myers Squibb、Revolution Medicines、Novartis和Novo Ventures获得与这项工作无关的研究资金。W.C.H.和A.J.A.从迪尔菲尔德获得了与这里描述的工作相关的资金。
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同行评审
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自然感谢匿名审稿人对这项工作的同行评审所做的贡献。
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自然
额外的信息
出版商的注意b施普林格《自然》杂志对已出版的地图和机构的管辖权要求保持中立。
出版商的注意
扩展数据图和表
图1 SHOC2全磷酸酶复合物的低温电镜图、接触面表面模型和二级结构注释。
一个用于对复杂结构建模的低温电镜图,使用所示的彩色图根据局部分辨率着色。这张地图被自动确定的地图削尖了<我>B-因子为- 90.7922 Å<年代up>2并过滤到局部分辨率,这两者都是由Relion中实现的方法决定的。b,在最终3D地图细化过程中确定的最终粒子集的角度分布的3D直方图。箱子的大小和颜色都与颗粒计数相对应。视图与中所示相同gydF4y2Ba(一),地图本身呈现在灰色直方图的中心。c,由最终粒子集生成的无参考2D类平均值。d,傅里叶壳相关(FSC)的独立改进的半地图,从最终的3D地图改进(蓝色),完整的地图和原子模型(橙色)。“金标准”半地图FSC计算和修正屏蔽效应使用赖利;基于2.9 Å全局分辨率,使用PHENIX对模型进行掩膜计算地图模型FSC。FSC=0.5和0.143阈值用虚线表示。半地图FSC以2.8925 Å分辨率越过0.143阈值,地图模型FSC以3.01 Å分辨率越过0.5阈值。e、未结合的SHOC2、PP1CA和MRAS的表面模型。灰色表示相互作用的表面。f,带有二级结构化标记的MRAS卡通表示。g, PP1CA卡通表示,带有二级结构化标签。h、SHOC2、LRR和PP1C的相互作用gydF4y2Ba我, SHOC2 N-term区域和PP1CjPP1C和MRASk图中蛋白-蛋白相互作用位点对应的局部电子密度图显示了SHOC2、LRR和MRAS。<一个d一个t一个-track="click" data-track-label="link" data-track-action="figure anchor" href="//www.sabinai-neji.com/articles/s41586-022-04928-2">4。SHOC2为蓝绿色,PP1CA为黄色,MRAS为洋红色。地图(2Fo-Fc)是4.5 sigma。
图2 SHOC2配合物的MD模拟(200 ns), T411和n端RVXF基序的SHOC2-PP1C接触面的低温电镜电子密度图,以及PP1C与配合物成员成对相互作用的AUC分析。
一个, SHOC2复合体的MD仿真系统概述。b,蛋白质α-碳的均方根偏差(RMSD)。c, SHOC2与PP1C接触残基对的相互作用分数。d, MRAS与SHOC2接触残基对的相互作用分数。e, MRAS与PP1C接触残基对的相互作用分数。f, SHOC2的T411(蓝绿色)和PP1CA的K147(橙色)及其邻近残基(左)和与PP1c的RVXF结合袋相互作用的SHOC2 n端残基(右)的局部电子密度图。地图(2Fo-Fc)是4.5 sigma。g与单独PP1C相比,在存在SHOC2和MRAS-GppCp的情况下,PP1C结合SHOC2或MRAS-GppCp的SV-AUC分析。
图3 SHOC2- mras结合表面视图,变异取代的硅能计算,以及SHOC2 M173突变的内在蛋白质稳定性和相互作用能与DMS功能评分的相关性。
的结构观gydF4y2Ba一个、SHOC2和b, MRAS的疏水性(黄色)和极性(蓝绿色)表面着色,红色轮廓表示疏水相互作用表面。c, Box和whisker图为野生型M173和变体模型之间计算的SHOC2-MRAS相互作用能的差异。基于它们的疏水性和电荷态进行硅诱变建模:疏水性(n = 8个残基计算能:I、V、L、F、M、A、W和P);极性不带电基团包括(n = 7个残基计算能:C、G、T、S、Y、n、Q);极带负电(n = 2残基计算能:D、E);极性正电荷(n = 3个残基计算能量:H, K和R)。中线表示中位数,须表示第一和第四四分位数,框边表示第二和第三四分位数。在晶须边界以外的所有其他观测数据点被绘制为离群值。平均值和异常值分别用叉和点表示。在DMS屏幕上的SHOC2 M173变异适应度得分在x轴和d,计算了SHOC2与复合物成员之间的蛋白质相互作用能;e对蛋白质内在稳定性的影响;和f,组合多元线性模型(0.12*接触能+ 0.25*蛋白质固有稳定性−0.75)在y轴上表示。线(蓝色)表示线性回归模型,最佳拟合线的95%置信区间(黑色虚线),R<年代up>2(拟合优度)和线性模型p值(回归系数显著非零的分析)。
图4低温电镜全酶中SHOC2和SHOC2晶体的比较。
一个,高保守性的SHOC2 LRRs的一级序列分析与上述序列一致。典型的高度保守的富含亮氨酸的重复基序如上所示;基于结构数据的疏水残基盒子(蓝绿色);LRR11和LRR12核心疏水性核心残基的破坏(蓝框)。b,两个相邻lrr之间的二面角测量值(红色文本)和晶体SHOC2在LRR1上的R104 α碳与LRR20上的I545 α碳之间的距离(用线表示),以及c, Cryo-EM全酶中的SHOC2。d晶体SHOC2和SMP全酶的200-ns MD模拟所反映的每残基波动。
图5与RAS-RAF二聚体多聚体单元相互作用的SHOC2复合物的计算机模拟。
一个对17个已建立的范德华、静电和溶剂化能(负s分数的自然对数)优先的模型进行了人工标注,以确定RAS成员在质膜内定向/嵌入的空间适应性(红点表示)。选择了在膜内容纳RAS定向的最有利的能量模型(模型6)。b建立了与二聚体多聚体(2x RAS、2x RAF、2x MEK和2x 14-3-3)相互作用的SHOC2复合物的结构模型c&d,额外的旋转视图对接的复杂。单个蛋白质单位被着色并标记。
图6 SHOC2(M173I)、PP1C(P50R)和MRAS(Q71L)突变的计算机建模和能量计算,以及MRAS复合体关联中PP1C亚型的评估。
一个肖克2 M173和模拟M173I突变的放大图,与MRAS上接触残基的距离测量。bPP1C P50和模拟P50R突变的放大图,与SHOC2上接触残基的距离测量。c, MRAS Q71和模拟Q71L突变的放大视图,与周围残基的距离测量。d,预测了WT和突变残基的相互作用能。e在MRAS-GppCp存在下,对PP1C亚型(PP1Cα/β/γ)形成的SHOC2全酶进行SV-AUC分析。1个技术重复的线迹,代表3个生物重复。
图7在SHOC2全磷酸酶复合体形成的背景下对RAS亚型的评估。
一个RAS亚型(MRAS、KRAS、HRAS、NRAS)的多序列比对分析(EMBL-EBI ClustalW)。开关I(红色)、开关II(蓝色)和P-loop(橙色)有标注。与PP1C(青色突出显示)和SHOC2(黄色突出显示)相互作用的MRAS残基如果起作用,则用方框标出<−1.5kcal/mol计算的配对相互作用。b,通过RAS异构体分子动力学模拟计算的平均相互作用能(n = 5个代表性帧/RAS异构体的平均值),误差条表示平均值的标准差。c, MRAS和KRAS复合物与活化的SHOC2-PP1C的BLI实验。结合常数的平均值(n = 3个技术重复,代表3个独立实验)(<我>K一个,<我>kd,<我>KD和k在)和误差条(标准差)。d从共转染flag标记的RAS和myc标记的SHOC2的293T细胞中免疫沉淀各种外源表达的致癌RAS亚型(代表3个生物重复)。
图8 SHOC2 DMS屏幕的高分辨率热图。
测井的高分辨率热图表示<年代ub>2-fold change (LFC)等位基因富集和缺失在曲美替尼处理和载体对照之间,以野生型(沉默突变体)的平均值为中心,并按比例缩放到无基因突变体(缩放后的LFC)的平均值,提供了相对于SHOC2 WT的富集(红色)和缺失(蓝色)。数值越高=保守性越低)和低温电镜数据中的蛋白质相互作用残基(PPI)(方法)。下面提供了一个额外的热图,它描述了根据生物物理特征分组的残留物的平均缩放LFC分数(橙色= GOF;紫色= LOF),包括负电荷(D/E)、正电荷(K/R)和疏水(G/A/V/L/I/M)、极性不带电(S/T/C/Y/N/Q)、非极性大芳族(F/W/Y/H)和螺旋破断(P/G)。
图9基于DMS和SHOC2复合物内残基接触点分析SHOC2残基的突变耐受性,以及SHOC2变异对低附着生长、基线MAPK信号传导和MEK抑制反应的影响。
一个,与核心残基(深绿色,n = 198位)和表面非接触残基(浅绿色,n = 329位)相比,复合构件PP1C(黄色,n = 28位)和MRAS(栗色,n = 26位)之间表面接触残基的平均位置活力。中线代表中位数,胡须代表第一和第四个四分位数,框边代表第二和第三个四分位数。bMIA PaCa-2敲除内源性SHOC2,稳定地重新表达各种SHOC2功能获得(红色)和功能丧失(蓝色)变异,将其接种于超低附着板中培养7天。通过Cell-Titer-Glo在x轴上显示了使用PaTu-8902的适应度屏幕上缩放的LFC的活力终点。误差条表示GILA CTG活力的标准差(n=6个技术重复;3个生物重复的代表性)。线(绿色)表示简单线性回归模型,95%置信区间(黑色虚线),R<年代up>2(拟合优度),线性模型p值< 0.0001(回归系数分析显著非零)。c在敲除内源性SHOC2的KRAS突变细胞系MIA PaCa-2中,野生型(WT)和功能获得或功能丧失(GOF/LOF)变体稳定表达。dP-S259 RAF1相对于总RAF1的密度测定定量,并归一化为野生型表达细胞的水平。中线表示中位数,胡须表示四分位数范围。***p<0.001, LOF (n = 5个变异)和GOF (n = 6个变异)SHOC2等位基因间的双侧t检验,代表3个生物重复。e在敲除内源性SHOC2的KRAS突变细胞系MIA PaCa-2中,WT和GOF/LOF变体稳定表达。western blot前用MEK1/2抑制剂trametinib (10nM)处理细胞24 h。fP-S259 RAF1相对于总RAF1的密度测定定量,并归一化为野生型表达细胞的水平。中线表示中位数,胡须表示四分位数范围。***p<0.001, LOF (n = 6个变异)和GOF (n = 6个变异)SHOC2等位基因间的双侧t检验,代表3个生物重复。g,在共转染HA-MRAS的293T细胞中,v5标记的SHOC2变异体的免疫沉淀。h,相对猎物密度分析,包括内源性PP1CB(黄色)和MRAS(褐红色)归一化到V5饵料(y轴)和DMS适应度评分(LFC Z-score) (x轴)。直线表示简单线性回归模型R<年代up>2(拟合优度),且线性模型p值< 0.0001(回归系数分析显著非零)表明,代表3个生物重复。gydF4y2Ba我, SHOC2 n端区域(残基60-68)的DMS结果通过序列标记图(ggseqlogo)在各自位置上的每个氨基酸取代来描绘(ggseqlogo)。
图10基于氨基酸取代的生物物理属性和N434D的硅诱变研究对SHOC2 LRR表面突变的功能后果,以及对SHOC2 T411A、Q249K和G63R突变的200-ns MD模拟。
SHOC2 LRR中介导复合物成员结合的三个主要区域:(1)C-term pp1c结合区-左;(2) n项pp1c结合区-中间;(3)凹面的MRAS结合面(右)以列表示。SHOC2的静电表面描述(红色=负;蓝色=正)一个&b, SHOC2 LRR区域表面结合PP1C和c, MRAS(第一行),以及标记的SHOC2的蛋白质-蛋白质相互作用残基。随后,根据每个给定表面位置取代残基的生物物理特征,对每个表面残基的SHOC2 DMS屏幕功能评分(Scaled LFC)进行平均,并用比色标度(橙色= GOF;紫色= LOF)。正电荷残基(K/R)的平均功能效应(平均缩放LFC)呈现(第二行)d, c项pp1c结合区-左;e, n项pp1c结合区-中间;f,凹面MRAS结合面-右。带负电荷残基(D/E)的平均功能效应(第三行)为g, c项pp1c结合区-左;h, n项pp1c结合区-中间;gydF4y2Ba我,凹面MRAS结合面-右。疏水残基-非极性,非芳香(G/A/V/L/I/M)的平均功能效应(第4行)j, c项pp1c结合区-左;k, n项PP1C结合区-中间;l,凹面MRAS结合面。gydF4y2Ba米,预测了SHOC2 WT和N434D突变在PP1C上与K150的相互作用能。n,在200-ns MD模拟中,WT与N434D突变接触残基对的相互作用分数。放大视图的shoc2n434o与PP1C K150的距离测量模拟了N434D突变。p, WT和突变的接触残基对的相互作用分数。r,放大视图的shoc2t411和模拟T411A突变与PP1C接触残基的距离测量。gydF4y2Ba年代与PP1C接触残基的距离测量,对shoc2q249和模拟Q249K突变的放大视图。t,模拟的shoc2g63和G63R突变与PP1C接触残基的距离测量的放大视图。计算出的相互作用能被着色到SHOC2蛋白表面,以便可视化。u,在稳定(ddG)蛋白相互作用位点发生突变的SHOC2变异体的箱形图<−1)、惰性(ddG: >−1和< 1)、不稳定(ddG: >−1和< 1)>1)通过FoldX计算。中线代表中位数,胡须代表第一和第五四分位数,框边代表第二和第四四分位数的SHOC2变异,其残基突变与PP1C相互作用,稳定(n = 18个变异),惰性(n = 912个变异),不稳定(n = 134个变异),或与MRAS相互作用,稳定(n = 13个变异),惰性(n = 779个变异),不稳定(n = 196个变异),在DMS屏幕中进行功能评估。
图11 SHOC2全磷酸酶复合物的可药性分析及所提出的SHOC2全磷酸酶复合物组装模型示意图。
一个·SHOC2复合物SiteMap分析,确定SHOC2 - pp1c之间可用药的结合袋;b, SHOC2-MRAS和c, PP1C-MRAS。dSiteScore的上限为1.0,以限制带电和高极性位点的亲水性影响。SiteScore为0.80,可以准确区分药物结合位点和非药物结合位点。对于可药物性评分,亲水性评分不设上限。e, SHOC2全磷酸酶复合物的假设模型。MRAS与GDP结合,而PP1C和SHOC2在细胞质中以结合/非结合平衡存在。在RTK刺激和MRAS - gtp激活后,SHOC2 - pp1c复合物与质膜上的MRAS结合,形成稳定的复合物,并可能将SHOC2全磷酸酶定位到具有集中ras结合的RAF1的脂质结构域,从而使RAF上的' S259 '去磷酸化,并使MAPK信号传导。
图1 SHOC2全磷酸酶复合物的低温电镜图、接触面表面模型和二级结构注释。
一个
图2 SHOC2配合物的MD模拟(200 ns), T411和n端RVXF基序的SHOC2-PP1C接触面的低温电镜电子密度图,以及PP1C与配合物成员成对相互作用的AUC分析。
一个
图3 SHOC2- mras结合表面视图,变异取代的硅能计算,以及SHOC2 M173突变的内在蛋白质稳定性和相互作用能与DMS功能评分的相关性。
的结构观gydF4y2Ba一个
图4低温电镜全酶中SHOC2和SHOC2晶体的比较。
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图5与RAS-RAF二聚体多聚体单元相互作用的SHOC2复合物的计算机模拟。
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图6 SHOC2(M173I)、PP1C(P50R)和MRAS(Q71L)突变的计算机建模和能量计算,以及MRAS复合体关联中PP1C亚型的评估。
一个
图7在SHOC2全磷酸酶复合体形成的背景下对RAS亚型的评估。
一个
图8 SHOC2 DMS屏幕的高分辨率热图。
测井的高分辨率热图表示<年代ub>2
图9基于DMS和SHOC2复合物内残基接触点分析SHOC2残基的突变耐受性,以及SHOC2变异对低附着生长、基线MAPK信号传导和MEK抑制反应的影响。
一个
图10基于氨基酸取代的生物物理属性和N434D的硅诱变研究对SHOC2 LRR表面突变的功能后果,以及对SHOC2 T411A、Q249K和G63R突变的200-ns MD模拟。
SHOC2 LRR中介导复合物成员结合的三个主要区域:(1)C-term pp1c结合区-左;(2) n项pp1c结合区-中间;(3)凹面的MRAS结合面(右)以列表示。SHOC2的静电表面描述(红色=负;蓝色=正)一个&b
图11 SHOC2全磷酸酶复合物的可药性分析及所提出的SHOC2全磷酸酶复合物组装模型示意图。
一个
补充信息
补充图1
来自扩展数据的未裁剪免疫印迹图7和图9。a,扩展数据的免疫印迹图7显示,在共转染flag标记的RAS和myc标记的SHOC2的293T细胞中,外源表达的致癌RAS亚型的表达。b,扩展数据免疫印迹图9显示,在敲除内源性SHOC2后,KRAS突变细胞系MIA PaCa-2中稳定表达了SHOC2变体。-肌动蛋白,样品处理控制。图9显示,在敲除内源性SHOC2并使用MEK1/2抑制剂曲美替尼处理后,KRAS突变细胞系MIA PaCa-2中稳定表达了SHOC2变体。-肌动蛋白,样品处理控制。图9显示了共转染HA-MRAS的293T细胞中v5标记的SHOC2变异体的免疫沉淀。-肌动蛋白,装载控制。western blotting检测蛋白质,使用指定的抗体,橙色矩形表示种植位置。
补充表1
mras配合物相互作用能。SHOC2-PP1C-MRAS复合物成员的所有残基相互作用能计算总结,包括突变体模型。
补充表2
深度突变扫描(DMS)屏幕数据。来自DMS屏幕的数据(每个变量水平缩放的LFC和平均位置缩放的LFC分数)。
补充表3
整合DMS和临床相关数据集。癌症(COSMIC)和noonan样综合征(ClinVar)的SHOC2、MRAS和PP1C的总结文件。
补充图1
来自扩展数据的未裁剪免疫印迹图7和图9。a,扩展数据的免疫印迹图7显示,在共转染flag标记的RAS和myc标记的SHOC2的293T细胞中,外源表达的致癌RAS亚型的表达。b,扩展数据免疫印迹图9显示,在敲除内源性SHOC2后,KRAS突变细胞系MIA PaCa-2中稳定表达了SHOC2变体。-肌动蛋白,样品处理控制。图9显示,在敲除内源性SHOC2并使用MEK1/2抑制剂曲美替尼处理后,KRAS突变细胞系MIA PaCa-2中稳定表达了SHOC2变体。-肌动蛋白,样品处理控制。图9显示了共转染HA-MRAS的293T细胞中v5标记的SHOC2变异体的免疫沉淀。-肌动蛋白,装载控制。western blotting检测蛋白质,使用指定的抗体,橙色矩形表示种植位置。
补充表1
mras配合物相互作用能。SHOC2-PP1C-MRAS复合物成员的所有残基相互作用能计算总结,包括突变体模型。
补充表2
深度突变扫描(DMS)屏幕数据。来自DMS屏幕的数据(每个变量水平缩放的LFC和平均位置缩放的LFC分数)。
补充表3
整合DMS和临床相关数据集。癌症(COSMIC)和noonan样综合征(ClinVar)的SHOC2、MRAS和PP1C的总结文件。
权利和权限
b施普林格《自然》杂志或其许可方根据与作者或其他权利人签订的出版协议,对本文拥有专有权;作者自行存档的接受的手稿版本的这篇文章是完全由这样的出版协议和适用法律的条款管辖。
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关于本文
引用本文
权建军,哈建,边勇,刘建军。<我>et一个l。SHOC2-MRAS-PP1C全磷酸酶复合物的结构-功能分析。<我>自然609, 408-415(2022)。https://doi.org/10.1038/s41586-022-04928-2
收到了<年代p一个ncl一个年代年代="u-hide">:
接受<年代p一个ncl一个年代年代="u-hide">:
发表<年代p一个ncl一个年代年代="u-hide">:
发行日期<年代p一个ncl一个年代年代="u-hide">:
DOI:https://doi.org/10.1038/s41586-022-04928-2
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权建军,哈建,边勇,刘建军。<我>et一个l。SHOC2-MRAS-PP1C全磷酸酶复合物的结构-功能分析。<我>自然609, 408-415(2022)。https://doi.org/10.1038/s41586-022-04928-2
收到了<年代p一个ncl一个年代年代="u-hide">:
接受<年代p一个ncl一个年代年代="u-hide">:
发表<年代p一个ncl一个年代年代="u-hide">:
发行日期<年代p一个ncl一个年代年代="u-hide">:
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震惊英国皇家空军
自然,结构与分子生物学(2022)
结构钥匙解锁RAS-MAPK细胞信号通路
自然(2022)
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自然
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