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ABP1-TMK对生长素全局磷酸化和生长素通道化的感知gydF4y2Ba

摘要gydF4y2Ba

植物激素生长素通过细胞核中具有良好特征的感知机制触发转录重编程。相比之下,生长素快速作用的机制,如离子通量的调节、蛋白质的快速磷酸化或生长素对其运输的反馈,仍不清楚gydF4y2Ba1克ydF4y2Ba,gydF4y2Ba2gydF4y2Ba,gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba.生长素结合蛋白1 (ABP1)是否是生长素受体已经争论了几十年gydF4y2Ba1克ydF4y2Ba,gydF4y2Ba4gydF4y2Ba.这里我们展示了一小部分gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2BaABP1分泌并在酸性pH下特异性结合生长素,这是典型的外质体。ABP1及其质膜定位伙伴跨膜激酶1 (TMK1)是生长素诱导的超快速全球磷酸化反应和包括H活化在内的下游过程所必需的gydF4y2Ba+gydF4y2Ba- atp酶和加速细胞质流动。gydF4y2Ba转化gydF4y2Ba和gydF4y2BatmkgydF4y2Ba突变体不能建立生长素运输通道,并表现出生长素诱导的血管形成和再生缺陷。缺乏结合生长素能力的ABP1(M2X)变体无法补充这些缺陷gydF4y2Ba转化gydF4y2Ba突变体。这些数据表明,ABP1是基于tmk1的细胞表面信号传导的生长素受体,介导全局磷酸化反应和生长素通道化。gydF4y2Ba

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图1:生长素与gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2BaABP1及其外胞体定位。gydF4y2Ba
图2:ABP1和TMK1在全球生长素磷酸化反应和下游细胞效应中的作用。gydF4y2Ba
图3:损伤后血管再生中的ABP1和TMKs。gydF4y2Ba
图4:ABP1和TMKs在生长素通道形成中的作用。gydF4y2Ba
图5:生长素与ABP1结合的重要性及其在管道化中的作用。gydF4y2Ba

数据可用性gydF4y2Ba

支持本研究结果的数据可在本文及其补充信息文件(包含所有图表、未裁剪的blots和凝胶图像的源数据的Excel文件)中获得。蛋白质组学数据存储在Proteome Exchange (PXD031063)。本文中的序列数据可以在gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba基因组计划数据库以下加入编号:gydF4y2BaAT4G02980gydF4y2Ba(转化),gydF4y2BaAT1G66150gydF4y2Ba(TMK1),gydF4y2BaAT1G24650gydF4y2Ba(TMK2),gydF4y2BaAT2G01820gydF4y2Ba(TMK3),gydF4y2BaAT3G23750gydF4y2Ba(TMK4),gydF4y2BaAT3G14470gydF4y2Ba(LRR4),gydF4y2BaAT2G18960gydF4y2Ba(AHA1),gydF4y2BaAT4G30190gydF4y2Ba(AHA2),gydF4y2BaAT5G20490gydF4y2Ba(肌凝蛋白XIK),gydF4y2BaAT1G62390gydF4y2Ba(MadB2 / PHOX2),gydF4y2BaAT2G25290gydF4y2Ba(MadB1 / PHOX1)gydF4y2BaAT5G20360gydF4y2Ba时间/ PHOX3)。通信和索取材料应寄给J.F.gydF4y2Ba源数据gydF4y2Ba都提供了这篇论文。gydF4y2Ba

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下载参考gydF4y2Ba

致谢gydF4y2Ba

我们感谢K. kubiasov出色的技术援助,感谢J. Neuhold、A. Lehner和A. Sedivy在维也纳生物中心核心设施提供的蛋白质生产和纯化技术援助;Creoptix用于GCI;感谢ISTA生物成像、电子显微镜和生命科学设施、CEITEC Masaryk大学植物科学核心设施、CELLIM核心设施(MEYS CR, LM2018129 Czech-BioImaging)和J. Sprakel的协助。J.F.非常感谢R. Napier提供的许多有见地的建议和支持。我们感谢Friml小组所有过去和现在的成员,感谢他们在过去七年中对澄清ABP1有争议的作用的努力的支持和其他贡献。该项目获得了欧洲研究委员会(ERC)在欧盟地平线2020研究与创新计划下的资助(资助协议号:742985给J.F.和833867给D.W.);奥地利科学基金(FWF);P29988到J.F.);荷兰科学研究组织(NWO); VICI grant 865.14.001 to D.W. and VENI grant VI.Veni.212.003 to A.K.); the Ministry of Education, Science and Technological Development of the Republic of Serbia (contract no. 451-03-68/2022-14/200053 to B.D.Ž.); and the MEXT/JSPS KAKENHI to K.T. (20K06685) and T.K. (20H05687 and 20H05910).

作者信息gydF4y2Ba

作者及单位gydF4y2Ba

作者gydF4y2Ba

贡献gydF4y2Ba

J.F.构思和协调实验,并根据所有作者的意见撰写论文。J.F, D.W.和T.K.解释了结果。以下人员进行了实验,分析了数据,并为他们的设计和解释做出了贡献:a.j., P.G.和W.A.K. (TEM);a.k., d.w., L.F.和M. Roosjen(快速磷蛋白质组学);A.M.和L.R. (western blotting、克隆和激酶活性分析);a.t., j.f., m.g., m.h., m.n., m.r anduch和S.T.(表型分析);最初Ž。(膜电位测量);C.G.(质量光度法);hr(克隆、定位及表型分析); E.M. and N.R. (regeneration and canalization analysis, GUS staining); I.V. (DARTS and MST); K.T. and T.K. (plasma-membrane ATPase activity); M.Z. (cytoplasmic streaming, circular dichroism analysis and GUS staining); and Z.G. (MST, western blotting, cloning and expression analysis).

相应的作者gydF4y2Ba

对应到gydF4y2Ba霁ř我FrimlgydF4y2Ba.gydF4y2Ba

道德声明gydF4y2Ba

相互竞争的利益gydF4y2Ba

作者声明没有利益冲突。gydF4y2Ba

同行评审gydF4y2Ba

同行评议信息gydF4y2Ba

自然gydF4y2Ba感谢Kenneth Birnbaum, Angus Murphy, Justin Walley和其他匿名审稿人对这项工作的同行评审所做的贡献。gydF4y2Ba同行评审报告gydF4y2Ba是可用的。gydF4y2Ba

额外的信息gydF4y2Ba

出版商的注意gydF4y2Bab施普林格《自然》杂志对已出版的地图和机构的管辖权要求保持中立。gydF4y2Ba

扩展数据图和表gydF4y2Ba

图1生长素结合的分析gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2BaTMK1和ABP1。gydF4y2Ba

一个gydF4y2Ba, dart化验gydF4y2BaTMK1: TMK1-GFPgydF4y2Ba植物。蛋白质提取物用IAA(蓝色)或苯甲酸(灰色)孵育。然后,添加不同数量的蛋白酶。印迹和定量(归一化到肌动蛋白水平)显示,IAA和苯甲酸存在时,蛋白酶诱导的降解相当,表明IAA与TMK1没有特异性结合。3个结果相似的独立实验的代表性。gydF4y2BabgydF4y2Ba,生长素与TMK1结合的MST分析。150 nM TMK1异种表达和纯化的胞外结构域(ECD)存在时IAA、NAA和苯甲酸的归一化结合曲线。图为10次测量(3或4次独立实验)的平均值±SD,但无法拟合曲线以确定结合动力学。gydF4y2BacgydF4y2Ba, gci辅助分析TMK1 ECD与IAA或苯甲酸作为对照配体的结合特性,使用Creoptix®WAVEsystem。将异源表达和纯化的TMK1 ECD固定在指定的水平上,然后将不同浓度的IAA或苯甲酸在不同pH下的缓冲液中进行反应。5.5和7.6)进行结合动力学分析。未检测到IAA与TMK1 ECD结合。gydF4y2BadgydF4y2Ba,对异源表达的ABP1进行DARTS检测。将纯化蛋白与不同量的pronase酶混合物混合。印迹和定量分析显示,在10 μM IAA浓度下,标记的ABP1较少发生蛋白酶诱导的蛋白水解,这与多次稀释的pronase一致,表明IAA与ABP1存在关联。通过抗his - hrp抗体验证了这一点,以确保可视化条带的特异性。强度分布图绘制在斑点下面的图表中。3个独立实验的代表性,结果相似。gydF4y2BaegydF4y2Ba对照无酶样品的dart结果如图所示。gydF4y2Ba1gydF4y2Ba.蛋白质提取物gydF4y2Ba35 s:: ABP1-GFPgydF4y2Ba表达植株用苯甲酸(灰色)或IAA(蓝色)孵育。将印迹强度量化并归一化为无pronase样品的平均肌动蛋白强度。在这些无pronase对照样品中,我们验证了各自的潜在配体在其浓度下的存在并不影响靶蛋白的稳定性。3个结果相似的独立实验的代表性。gydF4y2BafgydF4y2Ba,所有基于gci的ABP1结合分析概览表及图表。在91.5 nM ~ 200 μM的连续稀释范围内对潜在配体IAA和苯甲酸进行了评价。可检测到IAA结合动力学,pH为5.5时Kd估计为13.7 μM, pH为7.6时Kd估计为1943 μM。gydF4y2BaggydF4y2Ba75 nM ABP1在pH值5.5(蓝色)、100 nM ABP1在pH值7.0(灰色)或100 nM ABP1在pH值7.5(黑色)存在时IAA与ABP1的归一化结合曲线。IAA浓度从61 nM到2 mM不等。图中为10次测量的平均值±SD;2 (pH 7.5)或4 (pH 5.5, pH 7.0)独立实验。估计的Kd值证实在胞外体pH为5.5时IAA有效结合,而估计的Kd值与大SD表明在pH 7.0和pH 7.5时没有结合。gydF4y2BahgydF4y2Ba, pH 7.0时,配体与ABP1结合的MST分析。IAA归一化结合曲线(蓝色;相同的灰色在S1g)和l -色氨酸(黑色)到100 nM ABP1。配体浓度从61 nM到2 mM不等。图中为10次测量的平均值±SD;4个独立实验。SD较大的Kd值表明这些配体在pH 7.0时没有结合。gydF4y2Ba我gydF4y2Ba, MST分析在pH 7.5下与ABP1结合的配体。IAA归一化绑定曲线(蓝色,与扩展数据图中黑色相同)gydF4y2Ba1克gydF4y2Ba)和控制配体苯甲酸(灰色)到75 nM ABP1。配体浓度从61 nM到2 mM不等。图中为10次测量的平均值±SD;2个独立实验。估计的Kd值和SDs远高于pH为5.5时的值,表明这些配体在pH为7.5时没有结合。gydF4y2Ba

源数据gydF4y2Ba

图2 apoplastic ABP1定位的TEM分析。gydF4y2Ba

一个gydF4y2Ba的示例TEM图像gydF4y2BaRPS5A: ABP1-GFPgydF4y2Ba模拟物和IAA(1µM)孵育后的根细胞。较低的“变焦”面板是高倍率的离体区域图像gydF4y2BaRPS5A: ABP1-GFPgydF4y2Ba(IAA)细胞显示胞外抗gfp信号。箭头表示金颗粒。规模的酒吧;上部,1µm;更低,500纳米。gydF4y2BabgydF4y2Ba用透射电镜(TEM)测定模拟或1µM IAA培养的WT和RPS5A::ABP1-GFP植物根细胞中胞外定位抗gfp金颗粒的密度。图为平均值±SEM。N:重复3次实验。WT Mock, 37张;WT IAA, 43张;ABP1模拟,45张图片;ABP1 IAA, 47张图片。Kruskal-Wallis分析(χgydF4y2Ba2gydF4y2Ba= 99.59, df = 3, P = 1.90E-21),然后进行连续性校正的未校正非配对双侧Wilcoxon秩和检验。WT模拟与WT IAA: P = 0.3659, WT模拟与ABP1模拟:P = 1.16E-11, WT IAA与ABP1 IAA: P = 7.10E-13, ABP1模拟与ABP1 IAA: P = 0.3118。**** p≤0.0001。gydF4y2BacgydF4y2Ba示例:an的TEM图像gydF4y2BaRPS5A: ABP1-GFPgydF4y2Ba根细胞显示ER的抗gfp金标(箭头)。比例尺,200nm。gydF4y2BadgydF4y2Ba, WT和的示例TEM图像gydF4y2Ba转化:GFP-ABP1gydF4y2Ba用抗gfp免疫金颗粒标记的茎尖分生组织细胞(箭头)。模拟或1µM IAA孵育。比例尺,200nm。gydF4y2Ba

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图3全局、超快生长素磷酸化反应和快速细胞效应。gydF4y2Ba

一个gydF4y2Ba模拟处理的超快速磷酸化蛋白质组学(2分钟)gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba的根源。日志分布gydF4y2Ba2gydF4y2Bap -肽磷酸化差异显著(FDR < 0.05)gydF4y2Batmk1-1gydF4y2Ba和gydF4y2Baabp1-TD1gydF4y2Ba两种突变体都表现出全局低磷酸化。gydF4y2BabgydF4y2Ba,模拟治疗(2分钟)gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba的根源。火山图描绘了原木gydF4y2Ba2gydF4y2Ba折叠变化(x轴;gydF4y2Batmk1-1gydF4y2Ba与WT相比)和统计显著性(y轴)。红色突出显示的是显著调节的p -肽的一个子集(FDR < 0.05)gydF4y2Baabp1-TD1gydF4y2Ba/ WT。这显示了全域的低磷酸化gydF4y2Batmk1-1gydF4y2Ba两种突变体之间有广泛的功能重叠。gydF4y2BacgydF4y2Ba,模拟治疗(2分钟)gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba的根源。火山图描绘了原木gydF4y2Ba2gydF4y2Ba折叠变化(x轴;gydF4y2Baabp1-TD1gydF4y2Ba与WT相比)和统计显著性(y轴)。红色突出显示的是显著调节的p -肽的一个子集(FDR < 0.05)gydF4y2Batmk1-1gydF4y2Ba/ WT。这显示了全域的低磷酸化gydF4y2Baabp1-TD1gydF4y2Ba两种突变体之间有广泛的功能重叠。gydF4y2BadgydF4y2Bap -肽的相对质谱强度gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2BaMadB类比(MadB1, MadB/At5g20360, MadB2/PHOX2)。生长素(IAA, 100 nM, 2 min)处理,4个独立生物重复,平均值±SD。星号表示根据材料和方法中描述的全球磷蛋白组学比较整理的罗斯福控制的p值。MadB1gydF4y2BaS391gydF4y2Ba(WT与gydF4y2Batmk1-1gydF4y2Ba:由于低检测,没有统计数据,WT与gydF4y2Baabp1-TD1gydF4y2Ba: P = 0.0354), MadB2gydF4y2BaS261gydF4y2Ba(WT与gydF4y2Batmk1-1gydF4y2Ba: P = 0.1562, WT对gydF4y2Baabp1-TD1gydF4y2Ba: P = 1.17E-06)gydF4y2BaS208gydF4y2Ba(WT与gydF4y2Batmk1-1gydF4y2Ba: P = 0.0393, WT与gydF4y2Baabp1-TD1gydF4y2Ba: P = 0.0035), MadB2gydF4y2BaT215gydF4y2Ba(低检出率,无统计),MadB2gydF4y2BaS216gydF4y2Ba(低检出率,无统计),MadB2gydF4y2BaS263gydF4y2Ba(WT与gydF4y2Batmk1-1gydF4y2Ba: P = 0.0926, WT vsgydF4y2Baabp1-TD1gydF4y2Ba: p = 0.0056)。* p≤0.05,** p≤0.01,**** p≤0.0001。gydF4y2BaegydF4y2BaWT成熟根区稳态膜电位(MP)和iaa诱导的去极化(mV);gydF4y2Baabp1-c1gydF4y2Ba和gydF4y2Batmk1-1gydF4y2Ba100 nM IAA处理后的突变体。值为平均值±SEM(去极化振幅:WT, n = 9;gydF4y2Baabp1-c1gydF4y2Ba, n = 10;gydF4y2Batmk1-1gydF4y2Ba, n = 3;膜电位:WT, n = 26;gydF4y2Baabp1-c1gydF4y2Ba, n = 35;gydF4y2Batmk1-1gydF4y2Ba, n = 11)。gydF4y2BafgydF4y2Ba,生长素敏感性gydF4y2Baabp1-c1gydF4y2Ba根的生长。图上的数据代表的是归一化增长率gydF4y2Baabp1-c1gydF4y2Ba突变体与gydF4y2Bacomp-c1gydF4y2Baline和WT, mean±SD (Col-0 DMSO, n = 54;Col-0 3 nM IAA, n = 45;Col-0 5 nM IAA, n = 54;gydF4y2Baabp1-c1gydF4y2BaDMSO, n = 81;gydF4y2Baabp1-c1gydF4y2Ba3 nM IAA, n = 90;gydF4y2Baabp1-c1gydF4y2Ba5 nM IAA, n = 108;gydF4y2Bacomp-c1gydF4y2BaDMSO, n = 90;gydF4y2Bacomp-c1gydF4y2Ba3 nM IAA, n = 81;gydF4y2Bacomp-c1gydF4y2Ba5 nM IAA, n = 81)。经双因素方差分析,生长速率对生长素的敏感性差异无统计学意义。gydF4y2BaggydF4y2Ba,生长素敏感性gydF4y2Baabp1-TD1gydF4y2Ba根的生长。图上的数据代表的是归一化增长率gydF4y2Baabp1-TD1gydF4y2Ba突变体与gydF4y2Bacomp-TD1gydF4y2Baline和Col-4,平均值±SD (Col-4 DMSO, n = 81;Col-4 3nM IAA, n = 81;Col-4 5 nM IAA, n = 90;gydF4y2Baabp1-TD1gydF4y2BaDMSO, n = 90;gydF4y2Baabp1-TD1gydF4y2Ba3 nM IAA, n = 72;gydF4y2Baabp1-TD1gydF4y2Ba5 nM IAA, n = 99;gydF4y2Bacomp-TD1gydF4y2BaDMSO, n = 81;gydF4y2Bacomp-TD1gydF4y2Ba3 nM IAA, n = 72;gydF4y2Bacomp-TD1gydF4y2Ba5 nM IAA, n = 90)。经双因素方差分析,生长速率对生长素的敏感性差异无统计学意义。gydF4y2BahgydF4y2Ba细胞质流速随IAA浓度的增加而增加。WT幼苗分别用0、10、20、50和100 nM IAA处理30 min。根伸长区表皮细胞中有快速移动的颗粒。误差条表示平均值±SD (n = 72个粒子,每种条件下来自8个幼苗的24个细胞)。单因素方差分析(FgydF4y2Ba4354年gydF4y2Ba= 16.32, P = 2.80E-12), Dunnett多重比较检验见图。* p≤0.05,**** p≤0.0001。gydF4y2Ba我gydF4y2Ba,生长素触发的细胞质流动加速在gydF4y2Ba转化gydF4y2Ba突变的等位基因却在互补体中得到恢复gydF4y2Ba转化gydF4y2Ba行。误差条表示平均值±SD (n = 63个粒子,每种条件下来自7个幼苗的21个细胞)。双向方差分析(交互效应:FgydF4y2Ba4608年gydF4y2Ba= 2.29, p = 0.0585;基因型效应gydF4y2Ba4612年gydF4y2Ba= 5.74, p = 0.0002;治疗效果:FgydF4y2Ba1612年gydF4y2Ba= 37.26, P = 1.84E-09), Šidák多重比较检验见图。** p≤0.01,*** p≤0.001。gydF4y2BajgydF4y2Ba.生长素触发的细胞质流动加速在gydF4y2Batmk1gydF4y2Ba和gydF4y2Batmk4gydF4y2Ba突变体。不像gydF4y2Batmk4gydF4y2Ba,gydF4y2Batmk1gydF4y2Ba根已经加速了细胞质的流动,但这两种突变体在很大程度上对生长素不敏感。误差条表示平均值±SD (n = 54个粒子,每种条件下来自6个幼苗的18个细胞)。双向方差分析(交互效应:FgydF4y2Ba2318年gydF4y2Ba= 9.16, P = 0.0001), Šidák的多重比较检验如图所示。**** p≤0.0001。gydF4y2Ba

源数据gydF4y2Ba

图4 ABP1和TMKs在血管形成和再生中的作用。gydF4y2Ba

一个gydF4y2Ba, GUS染色显示特异性上调gydF4y2BaTMK1:格斯gydF4y2Ba,gydF4y2BaTMK3:格斯gydF4y2Ba和gydF4y2BaTMK4:格斯gydF4y2Ba伤口周围的表达在受伤后2或4天(日)。2个实验的代表性显微照片(每个实验n = 8)。比例尺,100µm。gydF4y2BabgydF4y2Ba, GUS染色显示特异性上调gydF4y2Ba转化:格斯gydF4y2Ba但不是gydF4y2BaLRR4:格斯gydF4y2Ba伤口周围的表情。gydF4y2Ba转化:GFP-ABP1gydF4y2Ba证实GUS染色。2个实验的代表性显微照片(每个实验n = 8)。比例尺,100µm。gydF4y2BacgydF4y2Ba,损伤后血管再生定量gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba茎在gydF4y2Baabp1-c1gydF4y2Ba和gydF4y2Baabp1-TD1gydF4y2Ba突变体以及相应的互补系(gydF4y2Bacomp-c1gydF4y2Ba和gydF4y2Bacomp-TD1gydF4y2Ba)证实,血管再生缺陷是由于破坏gydF4y2Ba转化gydF4y2Ba轨迹。每次观测的样本总数,n = 20。gydF4y2BadgydF4y2Ba茎上外源IAA(绿色椭圆形)触发通道的形成(甲苯胺蓝(TBO)显示);(白色箭头所示)从这个局部来源转移到WT中已有的维管组织,而不是gydF4y2Baabp1-TD1gydF4y2Ba施用后6天突变体(daa)。比例尺,100µm。gydF4y2BaegydF4y2Ba,量化gydF4y2Ba新创gydF4y2Ba应用后4天(4daa),由局部生长素源形成的血管(TBO显示)gydF4y2Baabp1-c1gydF4y2Ba和gydF4y2Baabp1-TD1gydF4y2Ba突变体以及相应的互补系(gydF4y2Bacomp-c1gydF4y2Ba和gydF4y2Bacomp-TD1gydF4y2Ba)证实了血管再生缺陷是由于gydF4y2Ba转化gydF4y2Ba轨迹破坏。每次观测的样本总数,n = 20。gydF4y2BafgydF4y2Ba,量化gydF4y2Ba新创gydF4y2Ba从局部生长素来源形成的血管(TBO显示)gydF4y2BatmkgydF4y2Ba突变体。gydF4y2Batmk4gydF4y2Ba显示出更强的缺陷gydF4y2Batmk3gydF4y2Ba和gydF4y2Batmk1gydF4y2Ba而gydF4y2Batmk2gydF4y2Ba血管形成几乎正常。每次观测的样本总数n = 20。gydF4y2Ba

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图5 ABP1和ABP1(M2X)蛋白表征、IAA结合分析及其在再生和生长素管道化中的作用。gydF4y2Ba

一个gydF4y2BaABP1(WT)和ABP1(M2X)蛋白的圆二色性(CD)光谱几乎相同。这和从普罗米修斯热稳定性测量得到的转变中点温度(ABP1(WT): 58.3°C, ABP1(M2X): 61.4°C)表明这两种蛋白质变体的折叠相似。误差条表示平均值±SD;n = 3。gydF4y2BabgydF4y2BaWestern blot检测ABP1(WT)和ABP1(M2X)蛋白在不同转基因品系中大小和表达水平相近。相关的分子量标记来自相同的凝胶和印迹。gydF4y2BacgydF4y2Ba,对异源表达和纯化的ABP1(M2X)进行DARTS检测。纯化蛋白与不同量的pronase酶混合物混合,30min后停止蛋白水解。得到的降解蛋白样品在SDS-PAGE上运行,并进行印迹以进行抗体辅助可视化。在10 μM IAA存在的情况下,pronase诱导的标记ABP1(M2X)的蛋白水解变化很大,不支持IAA与ABP1(M2X)的任何结合。强度分布图绘制在斑点下面的图表中。3个独立实验的代表性,结果相似。gydF4y2BadgydF4y2Ba,所有ABP1(M2X) gci结合分析概览表及图表。在91.5 nM ~ 200 μM的连续稀释范围内对潜在配体IAA和苯甲酸进行了评价。虽然ABP1和ABP1(M2X)可以固定在相同的水平面上(与扩展数据图相比)。gydF4y2Ba1 fgydF4y2Ba),只有ABP1(WT)可以观察到IAA结合动力学,而使用ABP1(M2X)的分析无法估计Kd。gydF4y2BaegydF4y2Ba,外源IAA处理(白色椭圆形)gydF4y2BaDR5rev:绿色荧光蛋白gydF4y2Ba在给药(daa) 4天后,茎触发了dr5可视化生长素通道(白色箭头表示)的形成gydF4y2Baabp1-c1gydF4y2Ba转化与gydF4y2Ba转化::GFP -转化gydF4y2BaWTgydF4y2Ba但不是在任何gydF4y2Ba转化:GFP-ABP1gydF4y2BaM2XgydF4y2Ba行。比例尺,100µm。gydF4y2BafgydF4y2Ba植物生长素来源对新生血管形成的定量研究gydF4y2BaDR5rev:绿色荧光蛋白gydF4y2Ba每个观测值的样本总数n = 40。gydF4y2BaggydF4y2Ba茎上外源IAA(绿色椭圆形)触发通道的形成(TBO可视化);由白色箭头表示)从这个本地源6日gydF4y2Baabp1-c1gydF4y2Ba转化与gydF4y2Ba转化::GFP -转化gydF4y2BaWTgydF4y2Ba但不是在任何gydF4y2Ba转化::GFP -转化gydF4y2BaM2XgydF4y2Ba行。比例尺,100µm。gydF4y2BahgydF4y2Ba,量化gydF4y2Ba新创gydF4y2Ba(g)。每次观察的样本总数n = 40。gydF4y2Ba

源数据gydF4y2Ba

补充信息gydF4y2Ba

补充图1gydF4y2Ba

该文件包含每个图的原始和未裁剪的数据,其中我们显示了western blot结果。根据相应的图对斑点进行标记,并指出裁剪的区域。gydF4y2Ba

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Friml, J., Gallei, M., gelov, Z.。gydF4y2Baet al。gydF4y2BaABP1-TMK对生长素全局磷酸化和生长素通道化的感知。gydF4y2Ba自然gydF4y2Ba609gydF4y2Ba, 575-581(2022)。https://doi.org/10.1038/s41586-022-05187-xgydF4y2Ba

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